QIAGEN Plasmid Plus Midi Kit (100)
详细描述
快速、便捷纯化至多250 μg转染级质粒DNA
- 20分钟内快速纯化至多24个样本
- 利用真空装置，可同时处理多个样本
- 低洗脱体积确保高浓度的DNA
- 独特的洗涤缓冲液确保较低的内毒素水平
- 适合多种应用
高效转染至敏感细胞系内。
采用图示的制备方法，使用QIAGEN Plasmid Plus Kit标准和高产量(HY) 实验方案制备质粒pCMVβ DNA。使用200 ng质粒DNA和0.5 μl Attractene Transfection Reagent或300 ng质粒DNA和0.75 μl Attractene Transfection Reagent转染Huh-7细胞。
使用QIAGEN Plasmid Plus Kits的内毒素水平。
使用Buffer ETR进行中量制备纯化，不同沉淀湿重 (g/l) 如图所示。采用QIAGEN Plasmid Plus技术获得较低的内毒素水平。Buffer ETR技术进一步降低了内毒素水平。
使用不同纯化方法获得的内毒素水平。
采用QIAGEN Plasmid Plus Kit可获得较其他供应商的硅胶纯化和阴离子交换技术更低的EU含量水平。使用EndoFree Plasmid Kit获得的EU含量低于检测范围。
QIAGEN Plasmid Plus Kits (QPP)可获得高产量。
对采用不同方法获得的质粒DNA产量进行比较。QIAGEN Plasmid Plus高产量实验方案 (QPP)、QIAGEN Plasmid Plus标准实验方案 (QPP)、QIAGEN Plasmid Kit (QP)、Supplier I和Supplier S——如图所示。图示单位为微克DNA/ml。
QIAGEN Plasmid Plus实验流程。
QIAGEN Plasmid Plus Kit可提供快速便捷的大量质粒制备方法。
色谱分析。
利用HPLC在阴离子交换纯化柱上对使用QIAGEN Plasmid Plus Mega Kit纯化的质粒DNA (100 μg) 进行分析，检测非质粒核酸污染 (即RNA或基因组DNA)。在质粒制备中不存在污染。
稳定的质量和性能
QIAGEN Plasmid Plus技术可达到与阴离子交换技术相同的性能和品质。QIAGEN Plasmid Plus纯化柱独特的结合试剂确保得到高纯度质粒DNA。QIAGEN Plasmid Plus Midi Kit提供高产量的实验方案和额外缓冲液，得到多达250 μg的高纯度质粒DNA，无RNA、蛋白质和基因组DNA等污染物。
转染级质粒DNA，内毒素水平低
内毒素，又名脂多糖或LPS，在纯化质粒过程的裂解步骤释放，是革兰氏阴性菌如E. coli细胞膜的组成部分。内毒素能引起非特异性免疫应答，这是转染实验的非可控变量，影响实验结果和重复性，使其难以比较和解释。
该试剂盒提供的洗涤缓冲液可将内毒素水平降至1 EU/μg DNA以下。（依宿主菌、培养基和细胞密度的不同而不同，如果细胞密度较高，内毒素水平也略高，在1–3 EU/μg DNA范围内。）这使得到的质粒DNA适合多种应用，包括在敏感细胞系中转染。
QIAGEN Plasmid Plus Midi Kit进行大规模质粒纯化，方便快捷。独特设计的QIAGEN Plasmid Plus纯化柱和创新的结合试剂，使其只需简单的结合–洗涤–洗脱过程。QIAGEN Plasmid Plus Kits可在20分钟内实现快速大规模的midi质粒制备。得到高浓度质粒DNA，无需乙醇沉淀可直接用于下游各种应用。该质粒DNA适用于要求小体积量的应用。
使用LyseBlue试剂，产量最大化
该试剂盒也包含LyseBlue指示剂，用于指示最佳的缓冲液混合状态。通过简单的颜色变化，就可避免常见的手动操作失误，防止细胞裂解不充分及SDS、基因组DNA和细胞碎片沉淀不完全。这种独特的缓冲液添加剂确保了细胞充分裂解和完全中和，使产量最大化。
QIAGEN Plasmid Plus Midi Kit纯化得到的转染级质粒DNA适合多种应用，例如：
- 转染多数细胞系（敏感细胞系如Huh-7）
- 限制性酶切
- 克隆
- 体外转录和翻译
- 测序
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特点
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参数
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| Applications | Transfection of most cell lines, cloning, enzymatic restriction, in-vitro translation/transcription, sequencing |
| Comment | Ultrafast and low hands-on parallel purification of ultrapure plasmid DNA with very low endotoxin levels. High DNA concentration without alcohol precipitation. |
| Culture volume/starting material | 25-50 ml |
| Description | For ultrafast purification of up to 250 µg (Plasmid Plud Midi Kit), up to 1 mg (Maxi Kit), up to 2,5 mg (Mega Kit) or up to 10 mg (Giga Kit) Transfection Grade Plasmid DNA |
| Final DNA concentration | ≥ 1 µg/µl |
| Plasmid type | Plasmids, cosmids |
| Processing | manual (centrifugation and vacuum), parallel processing |
| Samples per run; throughput | 1-24 samples per run |
| Technology | Advanced Silica technology (non-chaotrophic), Endotoxin reduction |
| Time per run or prep per run | 20 min |
| Yield | up to 250 µg |
