QIAGEN Multiplex PCR Kit (100)
详细描述
用于高特异性和灵敏度的多重PCR，无需优化
- 无需优化步骤
- 高特异性和高灵敏度，热启动
- 高度适合用于各种类型的多重PCR应用
- 使用简单，经济实惠
QIAGEN Multiplex PCR Kit提供方便的即用型预混液。QIAGEN Multiplex PCR Master Mix包含HotStarTaq DNA Polymerase和含有新型合成因子MP的独特PCR缓冲液。配合优化的盐浓度，MP因子可以促进引物与模板的特异性结合，使反应体系中所有的引物都能有效延伸，无需额外优化。该试剂盒还包含新型的辅助剂Q-Solution，有助于实现“困难”模板（比如，GC含量高的模板）的高效扩增。
成功的16重PCR。
在标准条件下使用QIAGEN Multiplex PCR Kit，且未进一步优化，或者在多种反应条件下使用Supplier AII的热启动DNA聚合酶，对16个靶点进行35个循环的多重PCR (99–955 bp)。[A] 每50 µl反应使用2.5个单位的Supplier AII的热启动DNA聚合酶以及标示Mg2+浓度的比较。[B] 每50 µl反应使用优化的Mg2+浓度 (3.5 mM) 以及标示量的Supplier AII (图A) 热启动DNA聚合酶的比较。使用QIAGEN Multiplex PCR Kit可确保获得成功。M：分子量标准。
对转基因小鼠进行基因分型。
使用QIAGEN Multiplex PCR Kit及3种引物对转基因小鼠进行筛选，鉴别野生型 (wt)、杂合突变体 (ht) 和纯合突变体 (hm) 小鼠。[A] 使用靶向重组激活基因2位点的引物组。[B] 使用靶向γ干扰素基因位点的引物组。M：分子量标准。(数据由德国不伦瑞克国家生物技术研究中心的S. zur Lage和S. Weiss提供。)
成功的微卫星分析。
使用1 ng的K562人基因组DNA和荧光素标记的引物进行微卫星位点D3S1358、TH01、D21S11、D18S51和Penta E分析。在ABI PRISM 377 Sequencer上对反应进行分析。上：QIAGEN Multiplex PCR Kit确保了高敏感度和一致的信号强度。下：使用Supplier AII的热启动DNA聚合酶获得的结果。
稳定、高效的退火。
Multiplex PCR Buffer确保了稳定且高效的引物退火。[A] NH4+离子可防止非特异性引物与模板的退火结合。[B] Synthetic factor MP是一种新型PCR添加剂，可增加模板周围的局部引物浓度。Synthetic factor MP与K+及其他阳离子相结合，可稳定特异性结合的引物，实现HotStarTaq DNA Polymerase介导的高效引物延伸。
QIAGEN Multiplex PCR Kit可确保高特异性和灵敏度的多重PCR扩增。该试剂盒能成功应用于各种多重应用，如转基因生物分型和微卫星分析。该混合物包含HotStarTaq DNA Polymerase，用于高效的平行扩增多个靶。扩增效率经新型的PCR缓冲液进一步优化，该缓冲液也包含在混合物中。独特的缓冲液确保了在广泛的PCR条件下PCR的特异性，无需优化步骤。试剂盒还包含辅助剂Q-Solution，用于扩增高GC含量的模板，优化PCR反应。
HotStarTaq DNA Polymerase规格
浓度：5单位/µl
重组酶：有
底物类似物：dNTP、ddNTP、dUTP、biotin-11-dUTP、DIG-11-dUTP、荧光-dNTP/ddNTP
延伸率：72°C下2–4 kb/分钟
半衰期：97°C下10分钟；94°C下60分钟
扩增效率：≥105倍
5'–>3'外切酶活性：有
Extra A辅助剂: 有
3'–>5'外切酶活性：无
污染核酸：无
污染RNA酶：无
污染蛋白酶：无
自吸泵活性：无
QIAGEN Multiplex PCR Kit是首个专为多重PCR研发的试剂盒，有即用型混合液规格。QIAGEN Multiplex PCR Master Mix包含预优化浓度的HotStarTaq DNA Polymerase和MgCl2、dNTPs和新型的PCR缓冲液专为多重PCR研发。该试剂盒在首次尝试多重PCR即获得成功。由于试剂盒内独特的预优化的试剂无需优化反应条件（比如，引物浓度，Mg2+和Taq DNA聚合酶）和循环参数。
HotStarTaq DNA Polymerase
HotStarTaq DNA Polymerase对 Taq DNA聚合酶进行改善，在室温下无聚合酶活性。这可以防止非特异性退火引物和在低温条件下的PCR设置和初始的PCR循环中形成引物二聚体。在95°C下，经15分钟诱导可激活HotStarTaq DNA Polymerase，可纳入各种现有的热循环程序中。
多重PCR缓冲液
这特殊的缓冲液包含优化的由K+和NH4+以及独特的PCR辅助剂、MP因子可增加模板引物的局部浓度。配合K+和其他阳离子、MP因子稳定特异性结合的引物，并能够用HotStarTaq DNA Polymerase进行高效的引物延伸。通过在每个PCR循环中高比率的特异性-非特异性引物结合，该新型的缓冲液维持每个PCR循环的特异性扩增。由于KCl和(NH4)2SO4独特的平衡结合，相比传统的PCR缓冲液，该缓冲液能在更广泛的退火温度和Mg2+浓度下，提供严格的引物退火条件。通过改变退火温度或Mg2+浓度可优化PCR，因此通常将优化过程最小化或无需要优化。
Q-Solution
Q-Solution是一种新型的PCR辅助剂，有助于扩增由DNA融化特性修改的困难模板，同时配合HotStarTaq DNA Polymerase提供。该独特的试剂可优化高度二级结构或富含GC的模板所致的效果欠佳的PCR。不同于其他常用的PCR辅助剂如DMSO，Q-Solution只用于一种工作浓度，并保证无毒和PCR纯度好。
QIAGEN Multiplex PCR Kit含有即用型、预优化的混合液，非常方便。使用混合液节省时间、简化反应体系构建流程，并通过消除移液失误和污染，增加可靠性，减少移液步骤和繁琐的计算。只需加入引物和模板来制备最终扩增混合液。混合液可在2–8°C储存，可快速设置多重PCR检测。该试剂盒提供的精简的实验方案确保快速简单的PCR设置。可在室温下设置反应，简单方便，易于使用。HotStarTaq DNA Polymerase可在95°C下孵育15分钟激活，因此可整合入各种现有的热循环流程中。
QIAGEN Multiplex PCR Kit高度适用于各种多重应用，包括：
- 转基因生物的分型和分析
- 微卫星的扩增和分析
- 细菌和病毒的分型和检测
- 用于SNP分析的多个DNA扩增
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特点
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参数
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| Applications | PCR, RT-PCR, multiplex PCR, typing, detection |
| Enzyme activity | 5' -> 3' exonuclease activity |
| Mastermix | Yes |
| Reaction type | PCR amplification |
| Real-time or endpoint | Endpoint |
| Sample/target type | Genomic DNA and cDNA |
| Single or multiplex | Multiplex |
| With/without hotstart | With hotstart |
