Strep-Tactin Magnetic Beads (2x1ml);For micro-scale purification of Strep-tagged proteins: 2 x 1 ml
详细描述
- 高效纯化Strep-tagged蛋白，尤其适用于真核细胞裂解物
- 小洗脱体积，便于检测
对任何表达体系中的Strep-tagged蛋白进行高度特异性检测。
将纯化的Strep-tagged硫氧还蛋白（10 ng）与哺乳动物（NIH-3T3）、昆虫（Sf9）和细菌（E. coli）的细胞粗提物（各10 µg总蛋白）混合。电泳和western转移后，使用Strep-tag抗体和化学发光检测法检测Strep-tagged蛋白。
少量纯化高纯度Strep-tagged蛋白。
使用Strep-Tactin Magnetic Beads从E. coli细胞裂解液中纯化图示的tRNA合成酶。L：澄清的细胞裂解液；F：流出液部分；E：洗脱液部分。
Strep-tagged蛋白结合到Strep-Tactin上，使用脱硫生物素洗脱。
以一次实验为例，使用Strep-Tactin Magnetic Beads可从E. coli细胞裂解液中纯化tRNA合成酶。使用Strep-Tactin Magnetic Beads也可进行高度特异性的检测。
Strep-tagged蛋白能高亲和力和特异性地结合到由链亲和素工程改造的Strep-Tactin上。漂洗后，蛋白可由低浓度的生物素（链亲和素的天然配体）或脱硫生物素（稳定、可逆结合的生物素类似物）洗脱得到。通过使用配有小的Strep-Tag II标签蛋白，可高效、标准地纯化得到在原核体系中表达的重组蛋白。此外，当其他标签可能不适用时，可选用Strep-Tag II体系，例如，使用EDTA等缓冲液添加剂会影响Ni-NTA/His-tag相互作用。
Strep-tagged蛋白可在pQE TriSystem Strep Vector中进行表达，采用Strep-Tactin亲和纯化操作流程可从真核细胞裂解液中得到高纯度蛋白。标签位于C–端可确保全长蛋白纯化。每毫升磁珠悬浮液可利用Strep-Tactin Magnetic Beads纯化得到200–300 µg Strep-tagged蛋白。磁珠加入到细胞裂解液，孵育、漂洗，可用含有生物素的缓冲液洗脱得到Strep-tagged蛋白。可用Strep-tag抗体对Strep-tagged蛋白进行高灵敏度和特异性的检测。
| 非离子去垢剂 | 离子和两性离子去垢剂 | 还原剂 | 其他 | 盐 |
|---|---|---|---|---|
| 2% Triton X-100 | 2% N-lauryl-sarcosine | 50 mM DTT | 25% Glycerol | 5 M NaCl |
| 2% Tween 20 | 0.1% SDS | 50 mM β-mercaptoethanol | 250 mM Imidazole | 2 M Ammonium sulfate |
| 2% N-octyl-β-D-glucopyranoside | 1.3% N-octyl-2-hydroxy-ethylsulfoxide | 50 mM EDTA | 1 M Calcium chloride | |
| 2% Igepal CA-630 (Nonidet P40) | 0.1% N-dodecyl-N,N-dimethylamine-N-oxide | 1 M Guanidine | ||
| 1 mM PMSF |
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特点
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参数
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| Applications | Proteomics |
| Binding capacity | 200–300 µg/ml |
| FPLC | Yes |
| Processing | Manual/automated |
| Scale | Micro scale |
| Start material | Cell lysate |
| Support/matrix | Magnetic agarose beads |
| Tag | Strep tag |
| Yield | Depends on cell type |
